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苇状羊茅与多年生黑麦草内生真菌菌丝基因组DNA提取的优化及PCR初步检测

廖芳; 刘跃庭; 崔铁军; 黄国明; 罗家凤; 尹旭芳 草业科学 2006年第06期

摘要:感染内生真菌的禾草在牧草和草坪业上具有重要的生态和经济意义,家畜采食感染Neotyphodium coenophialum和N.lolii的苇状羊茅Festuca arundinacea和多年生黑麦草Lolium perenne会发生中毒。研究收集天津口岸1998年以来进境的部分苇状羊茅和多年生黑麦草种子,对经镜检确认带有内生真菌的种子进行分离培养,对疑似菌株的茵丝用改进的Moiler等方法进行基因组DNA抽提,测定浓度及纯度,对照原方法,DNA的纯度有较大提高,浓度略有上升。Tubulin2基因的引物IS1~IS3扩增结果显示为单一的条带,结合形态学和序列比对,分离培养得到的茵株可以基本确定为N.coenophialum和N.lolii。根据Genbank中N.coenophialum和N.lolii的NC25基因序列设计出引物F1~R1,扩增得到能区分开N.coenophialum和N.lolii的单一条带(相差160bp),建立了N.coenophialum和N.lolii的PCR检测方法,结果准确可靠。

关键词:苇状羊茅内生真菌多年生黑麦草内生真菌基因组dna提取的优化pcr检测

单位:天津出入境检验检疫局; 天津300456

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