摘要：以垂穗披碱草（Elymus nutans）基因组DNA为模板，对ISSR—PCR反应体系中5个因素（TaqDNA聚合酶、Mg^2＋、模板DNA、dNTPs、引物）进行优化试验，建立垂穗披碱草稳定的ISSR—PCR反应体系及最佳扩增程序。在25μL反应体系中，最佳反应体系为2．5μL10×buffer（不合Mg^2＋）、1．0UTaq酶、2．0mmol／LMg^2＋、30～120ng模板DNA、0．25mmol／LdNTPs、0．25μmol／L引物。在优化体系的基础上筛选出11条多态性丰富，扩增稳定的引物，并通过设置退火温度梯度、循环次数梯度、延伸时间梯度，得到垂穗披碱草ISSR—PCR最佳扩增程序。反应程序：94℃预变性2min，94℃变性1min，51℃退火1min（视不同引物而定），72℃延伸1．5min，共41个循环，72℃延伸10min。通过对ISSR—PCR最佳反应体系和最佳扩增程序的验证，发现该反应体系和扩增程序具有较高的稳定性和较好的重复性。

关键词：垂穗披碱草 正交优化 

单位：中国农业科学院草原研究所 内蒙古呼和浩特010010 中国农业科学院研究生院 北京100081