摘要：柱花草（Stylosanthes）是优良的豆科牧草, 叶片中含有大量的多糖多酚, 本研究利用改良CTAB法抽提柱花草叶片中总DNA。通过正交试验设计L16（45）, 确立了柱花草SSR-PCR最佳反应体系：20 μL体系中1 μL 50 ng·μL-1模板DNA, 1.6 μL 5 μmol·L^-1引物, 1.6 μL 10 mol·L^-1dNTPs, 1.2 μL 25 mol·L^-1 Mg^2＋, 0.3 μL 5 U·μL-1Taq聚合酶, 2 μL 10×PCR Buffer（Mg^2＋ free）, 剩余用ddH2O补足。扩增反应程序为94 ℃变性40 s, Tm（不同退火温度）退火时间40 s, 72 ℃延伸45 s, 循环数35个。利用优化体系对来自7种柱花草的123对SSR引物在8个不同种柱花草中进行转移, 共筛选出44对引物在8种柱花草中都能有效扩增, 并从中筛选出26对在8个不同种柱花草中富含多态性引物, 为今后利用SSR标记对柱花草属的指纹图谱构建、遗传多样性分析、分子育种和品种鉴定与保护等工作提供重要依据。

关键词：柱花草 改进ctab法 体系优化 引物筛选 

单位：海南大学农学院 海南海口570228 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 海南儋州571737