摘要：为制备用于流式细胞仪分析的高纯度苜蓿(Medicago sativa)细胞核悬液,筛选最适合流式细胞仪分析的苜蓿细胞核提取方法,选用江苏地方品种淮阴苜蓿为供试材料,分别采用酶解法和机械解离法提取苜蓿细胞核悬液;用5种细胞核分离缓冲液及两种混合酶解液制备样品,根据各自优缺点筛选最适宜的苜蓿细胞核提取法。在机械法所用的5种细胞核提取缓冲液中,LB01缓冲液提取效果最好,提取的细胞核形态及内部结构完整,获得的细胞核量多。利用两种混合酶液制备苜蓿细胞核悬液,均出现倍性明显的峰,混合酶液Ⅰ制备的单细胞核悬液优于混合酶液Ⅱ,且酶解法制备细胞核悬液,可获得数量更多更完整的原生质体。但利用酶解法制备细胞核原生质体,其悬浮液中杂质多,需时较长。结果表明,LB01缓冲液为最适合制备苜蓿细胞核悬液的提取缓冲液。

关键词：苜蓿 流式细胞术 酶解法 细胞核提取缓冲液 

单位：扬州大学动物科学与技术学院