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碱茅PutSnRK2基因表达、克隆及其蛋白纯化

刘伟; 张欣欣 草业科学 2016年第10期

摘要:从NaHCO_3逆境胁迫下碱茅(Puccinellia tenuiflora)的cDNA文库中克隆得到PutSnRK2基因全长cDNA。PutSnRK2基因序列中存在1 077bp的开放阅读框,编码358个氨基酸,预测蛋白分子量为41.11kDa,等电点为5.63。实时荧光定量PCR分析表明,在NaHCO_3、NaCl、ABA和PEG胁迫下,PutSnRK2基因在碱茅叶、根中均受到显著诱导(P〈0.05)。同时用pGEX-6p-3载体构建了PutSnRK2基因的原核表达载体,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达纯化得到GST-PutSnRK2融合蛋白,为后续试验分析PutSnRK2蛋白的激酶活性、验证蛋白间的相互作用等研究奠定了基础。

关键词:碱茅snrk2非生物胁迫基因表达蛋白表达与纯化

单位:东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心; 黑龙江哈尔滨150040

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