摘要：NF-κB1是一类重要核转录因子，参与多种基因表达调控。NF-κB1能与奶牛乳腺中乳合成调控相关基因结合，发挥泌乳调节作用。研究应用PCR方法扩增奶牛NF-κB1基因编码序列，通过EcoRI和XhoI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-1载体中，构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-NF-κB1，转化大肠埃希氏菌BL21（DE3）。经酶切和测序鉴定正确后，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）大量诱导表达，8mol·L^-1。尿素裂解包涵体，裂解后上清经GST—Sepharose4B亲和纯化，SDS—PAGE和Westernblotting鉴定。结果表明，原核表达载体pGEX-4T-1-NF-κB1构建成功，SDS-PAGE证实NF-κB1融合蛋白存在于包涵体内，纯化后得到GST-NF-κB1融合蛋白，为进一步研究NF-κB1蛋白在奶牛泌乳中作用提供试验依据。

关键词：奶牛 克隆 原核表达 纯化 

单位：东北农业大学黑龙江省高校农业生物功能基因重点实验室; 哈尔滨150030