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尼古丁对大鼠骨髓间充质干细胞软骨分化的干预作用研究

邓宇; 陈廖斌 骨科 2017年第05期

摘要:目的从细胞水平证实尼古丁对大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)诱导分化为软骨细胞的干预作用。方法大鼠BMSCs传代至第3代,以海藻酸钠微球生物支架进行BMSCs三维培养。加入转化生长因子β1(TGF-β1)进行诱导分化,在细胞分化过程中,分别给予0.1、1、10、100μmol/L尼古丁干预,设对照组。第28天收获细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞代谢活力、阿利新蓝特殊染色检测细胞中氨基葡聚糖的含量、实时荧光定量PCR检测软骨分化标志基因(COL2A1、Aggrecan、COL1A1、COL10A1)的表达情况。结果诱导培养28d后,MTT法结果示不同浓度尼古丁干预后的各组细胞代谢活力与对照组细胞相比,没有明显改变;当尼古丁作用浓度分别为0、0.1、1、10和100μmol/L时,其BMSCs海藻酸钠微球的阳性染色区域占切片的百分比分别为90.1%、76.5%、64.8%、44.1%、4.5%;与对照组比较,尼古丁能显著抑制软骨诱导分化下的BMSCs细胞中Aggrecan、COL2A1的表达,同时促进COL1A1、COL10A1的表达(P均<0.05),并且存在浓度依赖性。结论尼古丁能够明显抑制大鼠BMSCs的软骨分化,导致其软骨分化质量差。

关键词:骨髓间充质干细胞尼古丁软骨分化组织工程

单位:武汉大学中南医院骨科; 武汉430071

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