摘要:为了制作鸡原钙黏蛋白8(protocadherin 8,pcdh 8)的多克隆抗体,试验设计了针对pcdh 8膜外肽段相应基因的1对引物,从鸡胚的脑组织中提取总RNA,通过RT-PCR合成cDNA;然后以cD-NA为模板扩增膜内肽段对应的基因片段,测序正确后将其克隆至原核表达载体pGEX-2TK中;在大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导表达GST-pcdh 802融合蛋白;利用Glutathione-sepharose 4B柱亲和层析纯化GST-pcdh 802融合蛋白,并采用足垫免疫的方法免疫大鼠制作多克隆抗体。结果表明:成功纯化了pcdh 8的融合蛋白,并制备出多克隆抗体,经Western-blot检测该抗体可用于鸡胚脑组织pcdh 8蛋白的表达检测。
关键词:原钙黏蛋白 异源表达 鸡胚
单位:新乡医学院生命科学技术学院河南省高校遗传性疾病与分子靶向药物重点实验室培育基地; 河南新乡453003
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