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双交换同源重组法构建Thermus thermophilus基因无痕敲除突变体

李海娟 湖南农业大学学报·自然科学版 2019年第02期

摘要:为在噬热栖热菌(Thermus thermophilus)中开发无需筛选标记的基于双交换同源重组的基因无痕敲除手段,以大质粒及染色体上的TTP0042与TTC0340_0341为靶基因,构建含有其两侧同源臂的基因敲除载体并转化T.thermophilusHB27细胞,将转化混合物涂布于不含筛选物质的培养基上,通过PCR及Southern杂交检验转化子的基因型。结果表明,采用线状的TTP0042基因敲除载体进行转化,获取表观Δ0042突变体的概率为10^-4,而使用闭合环状载体,该概率可达10^-3;基因型及表现型分析显示,这些表观Δ0042均为TTP0042无痕敲除型突变体。该敲除手段在染色体上的基因TTC0340_0341中得到验证,从300个单菌落中成功鉴定出了1个Δ0340_0341突变株。

关键词:噬热栖热菌双交换性同源重组基因无痕敲除

单位:西安文理学院生物与环境工程学院; 陕西西安710065

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