摘要：目的通过优化表皮细胞分离条件,最大程度的获得基底层内的表皮细胞.方法采用Dispase Ⅱ酶与胰蛋白酶联合消化法分离培养表皮细胞.将Dispase Ⅱ酶浓度、胰蛋白酶浓度及其作用时间作为实验因素,利用L16(44)正交表设计实验,优化最佳分离条件.观察不同分离条件对表皮细胞生长情况、贴壁率、克隆形成率的影响.正交设计的计量资料数据用方差分析.结果 Dispase Ⅱ酶、胰蛋白酶的作用浓度、作用时间对原代分离的活细胞数无显著影响;胰蛋白酶的作用浓度、作用时间对24h贴壁率有显著影响;胰蛋白酶作用时间显著影响克隆形成率.0.125% Dispase Ⅱ酶冷消化10h、0.1%胰蛋白酶37℃消化30 min,分离的原代表皮细胞克隆形成率最高.结论通过优化表皮细胞分离条件,可最大程度的得到有克隆形成能力的细胞,从而为利用表皮细胞作为人工皮肤的种子细胞奠定基础.

关键词：表皮细胞 克隆形成率 正交表设计 

单位：解放军第97医院; 江苏; 徐州; 221004; 第二军医大学第一附属医院