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靶向表皮生长因子受体shRNA质粒表达载体的构建和鉴定

邬跃刚; 曹政; 吴相柏; 魏亚元; 霍磊; 陶凯雄 山东医药 2006年第36期

摘要:目的构建靶向表皮生长因子受体(EGFR)的短发卡状RNA(shRNA)质粒表达载体并进行鉴定。方法设计两个小分子干扰RNA(siRNA)序列,体外合成DNA模板引物,与Pgenesil-1质粒构建成编码shRNA的表达载体,进行酶切鉴定和测序,再转染人大肠癌LoVo细胞,进行荧光摄像和G418抗性筛选。结果构建的质粒表达载体完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示为绿色,G418可以筛选出阳性克隆。结论成功构建了编码EGFR—shRNA的质粒表达载体,并可以进行稳定筛选。

关键词:表皮生长因子受体小分子干扰rna短发卡状rna质粒载体

单位:宜昌市第二人民医院; 湖北宜昌443000; 华中科技大学同济医学院附属协和医院

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