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目视化常见角膜致病真菌基因芯片的构建

张英朗; 王丽娅; 孙声桃; 李智涛 山东医药 2007年第12期

摘要:目的制备目视化常见角膜致病真菌基因芯片。方法将6属12种角膜致病真菌设计合成特异性寡核苷酸探针加尾后,固定于带正电荷尼龙膜的相应区域,用生物素标记的通用引物对12株标准菌株和82株临床分离株进行PCR扩增,将扩增产物与固定有寡核苷酸探针的尼龙膜进行反向斑点杂交,观测相应区域的斑点显色情况。结果12种真菌均产生了530~630 bp的PCR扩增产物,得到了具有各自特征的杂交后生物素-亲和素斑点显色图谱,可直接从该图谱上判断不同菌种。对82株临床分离株的检测敏感率为84.1%,未出现非特异性交叉反应。结论利用PCR结合反向斑点杂交技术制备目视化基因芯片,能够在3~4h完成对我国临床上常见的12种角膜致病真菌的菌种鉴定,特异性及敏感性较高。

关键词:基因芯片聚合酶链反应技术反向斑点杂交技术角膜病真菌

单位:郑州大学第一临床学院; 河南郑州450003; 河南省眼科研究所; 河南省生物工程中心; 河南郑州450003

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