摘要:目的对人过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(hPPARγ1)全长cDNA序列进行克隆并测序,为构建含hPPARγ1基因真核表达载体奠定基础。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPARγ1全长cDNA序列,胶回收目的条带后与pMD19-T载体连接并转化DH5α感受态菌,用XhoⅠ、SmaⅠ双酶切及基因测序筛选鉴定阳性克隆pMD19-hPPARγ1-T载体中hPPARγ1基因的完整性和忠实性。结果经酶切和测序证实,pMD19-hPPARγ1-T载体中插入的hPPARγ1基因序列与GeneBank中提交的序列一致。结论成功克隆了hPPARγ1基因,构建了pMD19-hPPARγ1-T中间载体。
关键词:cdna克隆 t载体 测序
单位:重庆医科大学; 重庆400016; 遵义医学院贵州省细胞工程重点实验室; 第三军医大学野战外科研究所分子生物学中心
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