摘要：目的构建含人组织型纤溶酶原激活剂（tPA）基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因逆转录病毒载体及产高滴度病毒的纯包装细胞系。方法PCR技术扩增目的基因tPA,定向克隆人逆转录病毒载体pLEGFP- N1中,测序鉴定重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-tPA,将其转入包装细胞PT67,培育全EGFP纯包装细胞系;测定病毒滴度。结果证实pLEGFP-N1-tPA中含有tPA基因。转染有pLEGFP-N1-tPA的纯PT67细胞产病毒滴度为1×10^7 CFU/ml。结论成功构建了pLEGFP-N1-tPA载体,并培育了产高滴度病毒纯包装细胞系。

关键词：逆转录病毒 纤溶酶原激活剂 遗传载体 包装细胞 

单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院; 湖北武汉430022