摘要：用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化Wistar大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）。第3代MSCs在10％二甲亚砜（DMSO）保护下放人液氮中（-196℃）冻存，6个月后复苏，检测其存活率，观察形态及生长情况，细胞计数试剂-8（CCK-8）检测MSCs的增殖能力、流式细胞仪检测细胞表面标记（CD29、CD34、CD44和CD45）的表达及细胞周期特性。结果：原代MSCs 72h贴壁，呈梭形，呈集落样生长；传代后，细胞变为形态均一排列有序的成纤维细胞样。冻存MSCs复苏后存活率为86．5％。冻存MSCs与未冻存MSCs比较，增殖能力、细胞表面标记及细胞周期无明显变化。认为密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs，采用液氮冻存大鼠MSCs不改变其增殖能力及生物学特性。

关键词：干细胞 细胞培养 冷冻保存 

单位：南方医科大学珠江医院 广东广州510280