摘要：目的构建针对人甲胎蛋白（AFP）基因的miRNA表达质粒，为进一步研究AFP基因功能奠定基础。方法沿mRNA序列寻找连续两个AA及后面的19个核苷酸，通过同源性比较，选择与其他任何基因无同源性的序列即作为潜在的miRNA靶位点，针对AFP基因的编码序列体外合成两段互补的寡核苷酸，与线性化的pcDNA^TM6．2-GW／EmGFP-miR RNAi EXPRESSION VECTOR载体连接后转化大肠杆菌，扩增、纯化获得所需质粒，以琼脂糖凝胶电泳、PCR及基因测序鉴定其相对分子质量及插入片段的序列。结果纯化质粒的相对分子质量为5．8kb，PCR鉴定结果符合目的条带（260bp左右）大小，插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符。结论成功构建了针对人AFP基因的miRNA表达质粒。

关键词：质粒 甲胎蛋白 基因 表达 

单位：山东省医学科学院基础医学研究所 山东济南250062 济南市中心医院