摘要：目的探讨人骨肉瘤细胞（U-2 OS）对甲氨蝶呤（MTX）耐药的机制。方法采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法，对U-2 OS细胞进行诱导培养，建立4株耐药细胞株U-2 OS／R1一U-2OS／R4。MTT法检测并比较各细胞亚系对MTX的敏感性，半定量RT-PCR法检测各亚系还原性叶酸载体（RFC）、二氢叶酸还原酶（DH-FR）mRNA表达。结果本实验成功建立了4株MTX耐药细胞亚系，即U-2 OS／R1～U-2 OS／R4；MTT法显示各亚系耐药性逐渐增加，MTX耐药与RFC mRNA表达降低及DHFR mRNA表达增加相关（P〈0．05）。结论RFC、DH—FR mRNA参与了U-2 OS细胞的MTX耐药；测定RFC、DHFR基因状态有助于筛选MTX耐药的骨肉瘤患者。

关键词：还原性叶酸载体 二氢叶酸还原酶 甲氨蝶呤 骨肉瘤 耐药 

单位：青岛大学医学院附属医院 山东青岛266003