摘要：构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3．1（-）／HKSV和非特异性表达载体pcDNA3．1（-）／SV，行酶切及测序鉴定。用脂质体转染法将构建的载体导入食管癌细胞EC9706细胞株，RT—PCR法检测SV40T抗原基因的表达，免疫组化法检测蛋白表达情况。结果限制性内切酶分析与测序结果示H^＋／K^＋ATP酶β亚基启动子与SV40T基因成功构建于pcDNA3．1（-）真核表达载体中；转染细胞提取基因组DNA及总RNA，分别经PCR和RTPCR反应扩增出618bp和272bp的特异性片段，非特异性表达载体pcDNA3．1（-）／SV瞬时转染时SV40T抗原表达阳性，而特异性表达载体pcDNA3．1（-）／HKSV转染组蛋白表达阴性。认为构建特异性表达载体pcDNA3．1（-）／HKSV并在食管癌细胞EC9706中检测其表达为转基因肿瘤动物模型的建立奠定了理论基础。

关键词：sv40t抗原 转染 真核载体 

单位：郑州大学基础医学院 河南郑州450052 郑州大学实验动物中心 漯河市第一人民医院