摘要：目的对人NKp30（hNKp30）进行基因克隆并在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础。方法提取人外周静脉血单个核细胞,分离纯化外周血总RNA。用PCR扩增hNKp30片段,克隆至质粒载体pMD18-T,对克隆的DN段行序列分析。用限制酶XhoI、EcoRI消化pMD18-T-hNKp30重组质粒,分离hNKp30片段,插入真核表达载体pIRES2-EGFP相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pIRES2-EG-FP-hNKp30,并转染COS-7细胞。结果PCR扩增DN段与hNKp30 cDNA大小一致。重组质粒pMD18-T-hNKp30的DNA序列分析显示,克隆DNA序列与文献报道hNKp30的cDNA序列一致。重组表达质粒pIRES2-EGFP-hNKp30转染COS-7细胞后,实现了hNKp30基因在COS-7细胞中的体外转染及瞬时表达。结论采用重组技术成功构建了hNKp30真核表达载体,为探讨NK细胞受体的特性及其信号转导机制奠定了基础。

关键词：杀伤细胞 真核表达 转染 基因重组 

单位：山东大学附属省立医院 山东济南250021