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人硫氧还蛋白基因分子克隆及真核表达载体的构建

苏伟 高枫 龚少愚 魏慧渊 孙茂民 江家贵 山东医药 2010年第45期

摘要:目的克隆人硫氧还蛋白(hTRX)cDNA序列并进行真核表达载体的构建。方法应用RT-PCR技术,以胎肝组织细胞总RNA为模板,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA基因,并克隆至pUCm-T载体中;经PCR和测序鉴定正确后,再构建重组真核表达载体pcDNA3.0-hTRX,采用PCR、双酶切和基因测序鉴定。结果将所得序列与GenBank(J04026)提供的序列比较,其酶活性中心(Trp-Cys-Gly-Pro-Cys)和基序与已知序列一致;PCR、酶切及测序鉴定表明真核表达载体构建正确。结论成功克隆编码hTRX成熟蛋白的cDNA基因,并构建其真核表达载体pcDNA3.0-hTRX。

关键词:人硫氧还蛋白基因克隆真核表达载体

单位:南京中医药大学无锡附属医院 江苏无锡214001 苏州大学公共卫生与放射学院

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