摘要：目的通过构建含E2F-1基因的真核表达载体,转染胃癌细胞MGC-803,获得Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株。方法 PCR扩增E2F-1基因片段,经限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选。用脂质体Lipofectamine 2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株。RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况。结果重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因完全一致。获取具Genectin抗性的细胞克隆,并进行了扩增。RT-PCR和Western blot证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1。结论成功获取具Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,为下一步的功能实验奠定了基础。

关键词：胃肿瘤 转染 

单位：深圳市宝安人民医院 广东深圳518101 东莞市人民医院 广西医科大学附属第一医院