摘要：目的以pcDNA3．1（＋）为骨架，构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因（h1DH1R132H）和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）序列的双顺反子真核表达载体。方法以内部核糖体进入位点（IRES）／EGFP片段为模板，扩增出IRES／EGFP片段，并在5’末端引入3×Flag标签；通过PCR介导的定点突变法，以pCMV—sports6．h1DH1为模板，扩增h1DH1R132H基因片段，并在3’末端引入3×Flag标签；通过PCR连接两种产物后经双酶切定向克隆入pcDNA3．1（＋）骨架；转化大肠杆菌后挑取阳性克隆，提取质粒进行PCR检测及基因序列测定。结果PCR检测7个菌落中有6个阳性克隆，DNA测序发现引入了h1DH1基因。结论成功构建了双顺反子真核表达载体pcDNA3．1（＋）-h1DH1R132H／3×Flag／IRES／EGFP，为研究人胶质瘤组织中R132H突变的作用机制奠定了基础。

关键词：颅内肿瘤 胶质瘤 异柠檬酸脱氢酶1 双顺反子 质粒 

单位：苏州大学附属第一医院 江苏苏州215006 盐城市第一人民医院