摘要:目的构建携带人金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)的重组腺病毒Ad-人TIMP1(hTIMP1),将其感染用同型半胱氨酸(Hcy)刺激的人脐静脉内皮细胞CRL-1730,观察该细胞基质金属蛋白酶(MMP)1、MMP9、TIMP1 mRNA的表达变化。方法在大肠杆菌BJ5183中通过同源重组构建重组腺病毒Ad-hTIMP1和对照重组腺病毒Ad—Track。将CRL-1730细胞分为空白对照组、Track对照组和基因治疗组,并根据加入Hcy浓度的不同各分为三个亚组,即空白对照组、生理浓度组和病理浓度组。病毒感染48h后加入Hcy刺激,6h后收集各组CRL-1730细胞,RT—PCR法检测CRL-1730细胞中的MMP1、MMP9、TIMP1 mRNA。结果Ad—hTIMP1和Ad—Track的滴度分别为1.9×1012VP/mL和0.6×1012VP/mL。基因治疗组Ad—hTIMP1感染CRL-1730细胞后,该细胞的TIMP1 mRNA表达明显高于空白对照组(P〈0.05),即使加入病理浓度的Hcy,CRL-1730细胞中TIMP1 mRNA的表达仍处于高水平,而MMP1、MMP9 mRNA的表达明显降低(P均〈0.05)。结论成功构建了Ad-hTIMP1和Ad—Track。重组腺病毒Ad-hTIMP1感染CRL-1730细胞后,该细胞中TIMP1 mRNA过表达,可抑制高浓度Hcy刺激造成的MMP1、MMP9 mRNA的表达升高,提示其可对抗Hcy对内皮细胞的损伤。
关键词:腺病毒 金属蛋白酶组织抑制剂 基质金属蛋白酶 同型半胱氨酸 基因疗法
单位:天津医科大学总医院 天津300052 天津市胸科医院
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