摘要：目的构建含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体，并比较其与单个靶特异干扰序列的shRNA载体的干扰效应。方法通过PCR方法扩增H1启动子序列，构建含有u6和Hl双启动子的shRNA载体，命名为PLKO．1-H1。设计2对针对EGFP基因不同位点的shRN段，同时设计2对无干扰作用的片段shSl和shS2作为对照。分别构建携带上述片段的慢病毒表达载体shEGFPl-H1-shS2、shSl-H1-shEGFP2及shEGFPl一HI—shEGFP2，同时以shSl-HI-shS2质粒作为对照。将重组质粒转染293t细胞，收集病毒感染Hela／EGFP细胞。比较各组之间细胞的荧光强度，并以Westernblot检测EGFP的蛋白表达情况。结果成功构建含有双启动子的shRNA慢病毒表达载体。实验组与对照组相比，EGFP蛋白表达水平明显下调，以shEGFPl-H1-shEGFP2重组质粒干扰效应最强。结论含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体存在协同干扰效应。

关键词：双启动子 rna干扰 协同效应 

单位：天津医科大学附属肿瘤医院 乳腺癌防治教育部重点实验室 天津市肿瘤防治重点实验室 天津300060