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高表达重组人组织激肽释放酶7基因的前列腺癌单克隆细胞株的构建

林志弟 莫林键 张成东 宣强 张悦宁 莫曾南 滕若冰 杨小丽 山东医药 2014年第10期

摘要:目的:建立稳定高表达重组人组织激肽释放酶7基因( KLK7)的前列腺癌细胞株DU145,为前列腺癌发生机制的研究奠定基础。方法 PCR法扩增KLK7 cDNA,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;经过限制性内切酶酶切、DNA测序验证正确后,以脂质体法转染人前列腺癌DU145细胞;通过G418筛选,每个单克隆细胞扩大培养,建立稳定转染KLK7的DU145单克隆细胞株。采用Western blot 法检测DU145细胞株KLK7表达。结果酶切鉴定及DNA 测序分析显示 pcDNA3.1-KLK7真核表达载体成功构建;转染后,成功获得稳定高表达KLK7的DU145单克隆细胞株。 Western blot 结果显示,pcDNA3.1-KLK7转染的DU145细胞KLK7表达量明显高于转染空载体组细胞(P<0.01)。结论 pcDNA3.1-KLK7真核表达载体的建立及稳定高表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株的建立,为研究KLK7在前列腺癌发生发展中的作用提供了条件。

关键词:重组人组织激肽释放酶基因7前列腺癌稳定细胞株真核表达载体

单位:广西医科大学第一附属医院 广西医科大学医学科学实验中心

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