摘要：目的构建人基质金属蛋白酶9(MMP-9)-PEX基因慢病毒载体。方法经RT-PCR、基因重组等技术构建包含MMP-9-PEX、MMP-9信号肽的慢病毒表达载体p BPLV-s PEX9,利用慢病毒四质粒包装系统、脂质体法共转染293FT细胞,包装出重组慢病毒。根据表达载体p BPLV携带signal-PEX9基因与否,分为空载体组和PEX组。慢病毒感染293FT细胞后,荧光显微镜下观察两组慢病毒载体绿色荧光蛋白(GFP)发光情况、Western blotting法验证MMP-9-PEX在293FT细胞上清中的表达。结果构建的pc DNA3.1-s PEX9重组质粒(669 bp)测序鉴定结果与Gen Bank序列完全一致,说明质粒构建成功。s PEX9片段与p BPLV连接重组质粒双酶切,凝胶电泳可见约1 284 bp的酶切片段,与预期理论值相符,说明慢病毒表达载体p BPLV-s PEX9构建成功。空载体组和PEX组转染293FT细胞72 h,均可见较强绿色荧光,并有大量合胞体出现,说明包装慢病毒成功;多次传代培养后,仍可见很强绿色荧光,提示MMP-9-PEX基因已稳定整合入293FT细胞基因组内。PEX组293FT细胞上清液检测到28 k D蛋白条带,与预计PEX分泌型蛋白分子量符合,空载体组未发现相应条带。结论本研究成功构建了携带人MMP-9-PEX基因的慢病毒,并将MMP-9-PEX基因高效导入了靶细胞,使之成功分泌出PEX蛋白。

关键词：基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶9信号肽 慢病毒载体 

单位：山东省交通医院