摘要：目的观察治疗性低温（TH）在缺氧期对心肌细胞自噬活性及自噬流的影响,并探讨其作用机制。方法取大鼠心肌细胞株H9c2,分为对照组、缺氧组、TH干预组、雷帕霉素干预组、雷帕霉素＋TH干预组,对照组置于37℃培养箱中培养,不作处理;缺氧组和TH干预组构建缺氧模型后,分别置于37、32℃培养箱中培养;雷帕霉素干预组和雷帕霉素＋TH干预组于构建模型前2 h加入雷帕霉素0.1μmol/L,构建模型后分别置于37、32℃培养箱中培养。采用Western blot法检测对照组、缺氧组和TH干预组自噬相关蛋白自噬微管相关蛋白轻链3B（LC3B）、p62、Beclin-1蛋白表达,以及应用雷帕霉素前后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）、核糖体蛋白S6（S6）的表达差异;采用腺病毒GFP-mRFP-LC3荧光瞬时转染技术检测自噬流。结果 1对照组、缺氧组和TH干预组LC3B、p62、Beclin-1蛋白表达：缺氧组和TH干预组LC3B、Beclin-1高于对照组（P均〈0.05）,缺氧组p62降低（P〈0.05）。TH干预组LC3B明显低于缺氧组,p62增高（P均〈0.05）。缺氧组与TH干预组Beclin-1无统计学差异。2雷帕霉素处理后自噬蛋白LC3B、p62及m TOR通路相关蛋白p-m TOR、p-S6表达：TH干预组与缺氧组比较LC3B降低,而p62、p-m TOR和p-S6均升高（P均〈0.05）;雷帕霉素干预组与缺氧组比较LC3B升高,p62降低（P均〈0.05）,而pm TOR和p-S6差异无统计学意义;雷帕霉素＋TH干预组与TH干预组比较LC3B升高,p62、p-m TOR和p-S6均降低,结果均有统计学差异（P均〈0.05）;雷帕霉素＋TH干预组与雷帕霉素干预组比较LC3B降低,p62升高（P均〈0.05）,而p-m TOR和p-S6差异无统计学意义。3双荧光自噬流：缺氧组和TH干预组的黄点和红点数多于对照组（P均〈0.05）,TH干预组的黄点与红点数少于缺氧组（P均〈0.05）。结论 TH能够抑制缺氧期心肌细胞自噬,其机制可能与促进m TOR信号通路相关蛋白表达有关。

关键词：治疗性低温 心肌细胞 缺氧 自噬 雷帕霉素 

单位：南方医科大学珠江医院; 广州510280