摘要：目的构建人SND1基因慢病毒载体,筛选稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌SKOV3细胞株,为探讨SND1基因对卵巢癌的调控作用提供细胞系模型。方法采用PCR法从pCMV-FLAG-SND1质粒中扩增FLAG-SND1基因片段,连接到慢病毒载体表达质粒pLVX-IRES-Hyg中,获得重组慢病毒载体pLVX-FLAG-SND1。以pLVX-FLAGSND1瞬时转染293T细胞48 h,采用Western blotting法检测SND1蛋白表达量。pLVX-FLAG-SND1重组质粒通过与包装质粒共转染293T细胞,获得携带FLAG-SND1的重组慢病毒。以慢病毒感染SKOV3细胞48 h,在细胞培养基中加入1μg/mL潮霉素B,筛选稳定表达SND1蛋白的细胞株,采用Western blotting法检测该细胞株内SND1蛋白表达量。结果重组慢病毒载体经双酶切和基因测序比对鉴定正确。重组慢病毒载体在瞬时转染的293T细胞中SND1蛋白表达量高于野生型SKOV3细胞（P〈0.01）。SKOV3细胞经慢病毒感染、药物筛选后获得的稳定表达株中SND1蛋白表达量高于野生型SKOV3细胞（P〈0.01）。结论成功构建了SND1基因慢病毒载体pLVXFLAG-SND1,并筛选出稳定表达SND1蛋白的SKOV3细胞株,为进一步明确卵巢癌发生、发展机制奠定了基础。

关键词：snd1基因 慢病毒载体 skov3细胞 卵巢癌 

单位：天津医科大学; 天津300070