摘要：目的观察顺铂耐药的肝癌细胞中p62的表达情况,及p62基因沉默后耐药肝癌细胞对顺铂敏感性的变化。方法培养肝癌亲本细胞Hep G2、Huh7,通过浓度梯度法建立顺铂耐药细胞模型,采用Western blotting法检测亲本Hep G2、Huh7细胞和耐药Hep G2、Huh7细胞中的p62蛋白。将耐药Hep G2、Huh7细胞分为沉默组和耐药组,分别转染p62 siRNA和siRNA Negative Control。在转染48 h后的0、1、2、3、4、5 d测算沉默组和耐药组细胞存活率。转染后48 h进行Hochest 33258染色观察沉默组和耐药组细胞凋亡核形态、计数凋亡细胞,采用Annexin VFITC/PI流式细胞术测算细胞凋亡率。转染后48 h采用Western blotting法检测沉默组与耐药组细胞中的核因子红细胞前体2相关因子2（Nrf2）,RT-PCR法检测Nrf2蛋白下游的谷氨酸半胱氨酸合成酶（GCL）、谷胱甘肽S转移酶（GST）、NADP（H）醌氧化还原酶（NQO1）、血红素氧化酶1（HO-1）、多药耐药蛋白（Mrp）基因。结果耐药的Hep G2、Huh7细胞中p62蛋白相对表达量分别高于亲本Hep G2、Huh7细胞（P均〈0.05）。转染48 h后的0、1、2、3、4、5 d沉默组Hep G2、Huh7细胞存活率低于耐药组（P均〈0.05）。沉默组凋亡细胞数及凋亡率均高于耐药组（P均〈0.05）。沉默组细胞中Nrf2蛋白及NQO1、GCL、GST、HO-1、Mrp mRNA相对表达量均低于耐药组（P均〈0.05）。结论顺铂耐药的肝癌细胞中p62蛋白表达上调;p62基因沉默后耐药肝癌细胞对顺铂的敏感性增强,其机制可能与Nrf2及其下游基因表达下调有关。

关键词：肝癌 肝癌细胞 耐药 顺铂 p62 

单位：中山市小榄人民医院; 广东中山528415; 滨州医学院烟台附属医院; 广东医科大学生物化学与分子生物学教研室; 广东省医学分子诊断重点实验室