摘要：目的探讨微小RNA-432（miR-432）对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR技术检测人骨肉瘤细胞MG-63、人成骨细胞h FOB1.19中miR-432表达。将对数生长期MG-63细胞随机分为三组,分别转染miRNA对照质粒（miR-NC组）、miR-432抑制质粒（miR-432 inhibitor组）及miR-432过表达质粒（miR-432组）,转染48 h时进行接种培养,分别检测细胞增殖（吸光度值）、迁移和侵袭情况。利用miRWalk和miRanda生物信息学软件预测miR-432靶基因可能为致癌基因CX3CL1,分别构建含有miR-432结合位点的CX3CL1基因3＇-UTR区野生型（CX3CL1-wt）和突变型（CX3CL1-mut）荧光素酶报告载体。将MG-63细胞分别共转染CX3CL1-wt或CX3CL1-mut报告载体和miR-432载体（观察组）,并设置共转染miR-NC载体作为对照组。转染48 h时,采用双荧光素酶试剂盒检测相对荧光素酶活性。结果 MG-63细胞中miR-432相对表达量低于h FOB1.19细胞（P〈0.01）。miR-NC组、miR-432 inhibitor组、miR-432组细胞中miR-432相对表达量分别为1.00±0.01、0.47±0.03、3.62±0.03,组间比较P均〈0.01。miR-432组培养24、36、48 h的细胞吸光度值均明显低于miR-NC组、miR-432 inhibitor组,miR-432 inhibitor组均明显高于miR-NC组。miR-432 inhibitor组及miR-432组细胞相对迁移率分别为（122±7）%、（65±4）%,相对侵袭率分别为（189±25）%、（49±11）%;上述指标组间比较P均〈0.05。CX3CL1-wt和miR-432共转染MG-63细胞后,观察组相对荧光素酶活性低于对照组（P〈0.05）;CX3CL1-mut和miR-432共转染细胞后,对照组和观察组相对荧光素酶活性分别为1.00±0.11、0.93±0.13,两组比较P〉0.05。结论 miR-432过表达可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,靶向调控致癌基因CX3CL1可能是其作用机制。

关键词：骨肉瘤 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭 cx3cl1 

单位：济南军区总医院; 济南250031