摘要：目的观察复制型HBV重组腺病毒Ad-HBV4.1在人肝癌细胞株HepG2中的复制情况及在Bal B/C小鼠肝细胞内的表达情况。方法用HBV4.1片段与重组腺病毒同源重组构建Ad-HBV4.1,测算Ad-HBV4.1的感染复数（MOI）。取MOI为100的Ad-HBV4.1感染HepG2细胞,采用免疫组化法检测Ad-HBV4.1感染的HepG2细胞HBs Ag、HBcAg,采用Southern吸印杂交法检测细胞HBV DNA复制中间体HBV DNA复制中间体。取Bal B/C小鼠30,分为5组,每组6只。一组1 m L的Ad-HBV4.1（约108efu/m L）尾静脉普通注射,二组1 m L的Ad-HBV4.1腹腔注射。三组10μg的pHBV4.1片段用1.8 m L生理盐水稀释后,尾静脉高压5~8 s内完成注射。四、五组分别生理盐水1.8 m L尾静脉、腹腔注射。注射第3 d处死三组小鼠,注射第1、3、5 d处死其余各组小鼠,取出肝组织,采用免疫组化法检测各组小鼠肝组织HBcAg。结果 Ad-HBV4.1感染的HepG2胞质中存在HBcAg表达,阳性率达90%以上,HepG2细胞胞质中未见HBcAg表达。转染72 h时,HepG2细胞中未能检测到HBV DNA复制中间体;Ad-HBV4.1感染的HepG2细胞中存在HBV DNA复制中间体。第1、3 d时一组小鼠肝组织中未见HBcAg,第5 d小鼠肝组织中可见HBcAg;第3 d三组肝组织中可见HBcAg;各时段二、三、四组小鼠肝组织均未见HBcAg表达。结论 Ad-HBV4.1感染HepG2细胞成功建立HBV复制与表达的体外模型,感染效率达90%以上,可见HBs Ag、HBcAg及HBV DNA复制中间体表达。Ad-HBV4.1尾静脉注射Bal B/C小鼠肝组织存在HBV表达。

关键词：乙型肝炎 乙肝病毒 重组腺病毒 病毒复制 

单位：四川省中西医结合医院; 成都610041