摘要：为了探究甘露醇分解利用途径对甘露醇合成的影响,在重组菌株R1(K-12/pTrc99a-mdh)的基础上,通过CRISPR/Cas9 敲除E.coli PTS 系统中的cmtA、cmtB、mtlA 基因,阻断了E. coli K-12 中甘露醇的分解途径,获得了重组菌株R3(K-12/ΔcmtAΔcmtBmdh^+)和R5(K-12/ΔcmtAΔcmtBΔmtlAmdh^+)。与出发菌株R1 相比,R3 的生长速率没有降低,而R5 的生长速率明显下降。并且R5 在以甘露醇为唯一碳源的培养基上已无法生长,说明cmtA、cmtB、mtlA 三个基因全部敲除后,菌株已无法再利用甘露醇作为碳源进行生长。最后,构建的重组菌株R5,测得MDH 酶活力为258 U/mL,用高效液相色谱对胞外产物进行检测,可检测到少量的甘露醇,为进一步探究大肠杆菌合成甘露醇的调控机制奠定基础。

关键词：基因敲除 甘露醇 甘露醇脱氢酶 nadh 

单位：省部共建食品营养与安全国家重点实验室工业微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院; 天津300457