摘要：目的：构建I-Ad/IgG2b Fc杆状病毒表达载体,使其在Sf9昆虫细胞内表达。方法：利用RT-PCR从BALB/c小鼠淋巴细胞中扩增出I-Adα、I-Adβ和IgG2b Fc目的基因序列,运用重叠PCR将I-Adα和I-Adβ分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,形成I-Adα-Fos和I-Adβ-Jun;利用酶切位点XbaⅠ将I-Adα-Fos与IgG2b Fc段相连,形成I-Adα-Fos-IgG2b Fc重组序列;分别将I-Adα-Fos-IgG2b Fc和I-Adβ-Jun插入杆状病毒表达载体pFastBac（TM）Dual的P_（PH）和P_（P10）两个启动子的下游,构建出重组载体pFastBac（TM）Dual＋[I-Ad/IgG2b Fc];采用PCR及限制性内切酶对所构建的载体进行鉴定并测序;将pFastBac（TM）Dual＋[I-Ad/IgG2b Fc]转入DH10Bac感受态,使其在转座子的作用下形成重组杆粒病毒Bacmid＋[I-Ad/IgG2b Fc],利用脂质体转染试剂将重组表达载体转染至Sf9昆虫细胞,P4后大量感染Sf9昆虫细胞,收集上清通过PEG20000浓缩可得到IAd/IgG2b Fc二聚体融合蛋白,通过双抗体夹心ELISA及Western blot对表达的蛋白进行检测。结果：PCR及酶切鉴定以及测序结果证实所构建的pFastBac（TM）Dual＋[I-Ad/IgG2b Fc]重组载体具有正确的序列;双抗体夹心ELISA和Western blot结果表明重组杆粒能成功感染Sf9昆虫细胞,并且表达的融合蛋白具有正确构象。结论：成功构建pFastBac（TM）Dual＋[I-Ad/IgG2b Fc]杆状病毒表达载体,并在Sf9昆虫细胞中表达,为研究I-Ad限制性的T细胞奠定了基础。

关键词：二聚体 昆虫细胞 杆状病毒表达载体 

单位：湖北医药学院附属东风医院; 十堰442008