摘要：根据透明颤菌血红蛋白(VHb)的氨基酸序列,按照植物偏爱密码子,对透明颤菌血红蛋白基因(vgb)进行优化改造,同时考虑到可实现分别克隆拼接的酶切位点,设计并合成了22条单链DNA短片段,通过拼接获得了全长450 bp的透明颤菌血红蛋白基因vgbM,并将其克隆至pUC19上,获得重组质粒pGSVHB.利用设计的引物,通过PCR在vgbM基因的5′端引入NcoI位点,将其克隆到原核生物高效表达载体pBV221上,获得质粒pBV221SVHB.转化E. coli.BL21并经热激诱导表达后,在培养物中检测到了约16 kD的VHb蛋白.经C0差示光谱分析测定,该蛋白具有生物活性.为透明颤菌血红蛋白基因vgbM在植物基因工程研究中的应用奠定了基础.

关键词：透明颤菌血红蛋白基因 酶切位点 偏爱密码子 克隆 植物基因工程 

单位：中国农业科学院生物技术研究所; 北京; 100081