摘要：依据柑桔溃疡病菌全基因组序列的独有保守区域设计筛选出的特异性引物对JYF5/JYR5,用于柑桔溃疡病菌的PCR检测,具有很好的检测特异性、灵敏度和稳定性.同时比较了PCR与DIA(斑点免疫结合技术)及传统的致病性测定法在检测灵敏度、稳定性及田间样品检出率等方面的差异.结果表明,PCR的检测灵敏度可达103～104 cfu·ml-1(每个反应体积约10个细菌),明显高于DIA(104～105 cfu·ml-1,每个样点约300个细菌);PCR、DIA和致病性测定法检测田间显症样品的检出率均可达到100%,而检测柑桔无症样品的检出率依次降低.此外,通过排除PCR抑制物质和在PCR反应体系中加入终浓度为15%的甘油,有效地降低了检测中存在的假阴性.

关键词：pcr dia 斑点免疫结合技术 致病性测定 柑桔 

单位：重庆大学基因工程研究中心; 重庆; 400030; 西南农业大学植物保护学院; 重庆; 400716