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大肠杆菌vpr基因突变株的蛋白表达及功能研究

孙建和; 严亚贤; 陆承平 中国农业科学 2006年第01期

摘要:【目的】进一步确定印,基因及相关蛋白的功能。【方法】在获得vpr同源基因突变株MC1061△vpr的基础上,构建了vpr基因突变株的回复株MC1061-C,并进行了噬菌体裂解试验、细胞壁吸附试验、蛋白表达和印迹试验。【结果】亲本株MC1061和回复株MC1061-C对VT2噬菌体C43b的裂解敏感,突变株MC1061△vpr抵抗噬菌体C43d的裂解。噬菌体吸附细胞壁试验中,吸附30min后,亲本株和回复株的上清液中分别存在6.4%和5.2%的游离噬菌体,吸附到90min时未有大量的游离噬菌体释放。噬菌体与突变株的细胞壁吸附30min后,上清液中有85.4%的游离噬菌体存在,表明VT2噬菌体能与亲本MC1061和回复株MC1061-C的细胞壁不可逆吸附,但不能与突变株MC1061△vpr,的细胞壁发生不可逆吸附。在蛋白表达中,Western blot显示回复株和亲本株均能转印出特异性90000蛋白主带,而突变株没有。【结论】vpr基因表达的分子量为90000的vpr蛋白与VT2噬菌体的裂解敏感性有关,可能是VT2噬菌体的裂解受体。

关键词:噬菌体裂解敏感性细胞壁吸附westernblot

单位:上海交通大学农业与生物学院; 上海201101; 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室; 南京210095

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