摘要：【目的】丝状支原体丝状亚种SC（Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC，MmmSC）是引起牛传染性胸膜肺炎（contagious bovine pleuropneumonia，CBFF）的病原体。成熟的脂蛋白LppQ N端是亲水性的，在自然感染和人工感染时，特异性免疫反应产生早，持续时间长，抗体滴度高，因此有理由相信脂蛋白LppQ N端片段将有可能成为一种理想的CBPP诊断抗原。【方法】由于TGA密码子在支原体中编码色氨酸（Trp），而在细菌中则为终止密码子，故利用一步重叠延伸PCR突变方法体外诱变中国生产抗原用毒株HVRI X的IppQ基因进行原核表达，利用重组抗原建立间接ELISA方法。【结果】序列分析表明，将IppQ基因第198位的A成功突变为G，并将突变后的脂蛋白LppQN端基因片段插入原核表达载体pET32a的多克隆位点，构建了原核表达载体。重组茵经诱导后，表达出了分子量约为42kD、带有6个组氨酸标签的重组融合蛋白，纯化后蛋白质纯度高达95％，Westernblot结果显示，重组蛋白具有很好的免疫活性。将纯化的蛋白质稀释至0．35μg·ml^-1，包被酶标反应板，优化反应条件，P／N为4．8（0．934／0．193）。应用TG-ROC统计软件分析确定阴阳性血清临界OD值为0．376，敏感性为95．8％（46／48），特异性为98．9％（161／163）。应用间接ELISA和补体结合试验（CFT）对来自3个省自治区3817头份牛血清进行了检测。【结论】Kappa值为0．63，两种方法存在中、高度一致性。

关键词：牛 牛传染性胸膜肺炎 脂蛋白lppq 突变 elisa 

单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所／国家牛传染性胸膜肺炎参考实验室; 哈尔滨150001; 吉林农业大学动物科技学院; 长春130118