摘要：【目的】探讨应激时热休克蛋白mRNA转录水平的变化。【方法】根据HSP90、HSP10和GAPDH mRNA序列，设计并合成引物，将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体，重组质粒经筛选、鉴定，体外转录出RNA，梯度稀释作为阳性模板，用于标准曲线的制定和样品检测，建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台，并用于检测长途运输猪心脏和肝脏中HSP70及HSP90 mRNA转录水平的改变。【结果】经1、2、4、6和10h的运输应激后，组织中HSP70 mRNA的转录水平随着运输应激时间的延长一直呈现出上升的趋势，运输应激到10h时HSP70 mRNA的转录水平升到最高，肝脏和心脏组织中HSP70 mRNA的转录水平分别为对照组的2．5和4．1倍；HSP70 mRNA的转录水平则随着运输应激时间的延长呈下降趋势。【结论】运输应激可以影响HSP mRNA转录水平的变化，并且对不同家族的HSP mRNA转录水平的影响不同；HSP70 mRNA的转录水平有望成为猪运输应激的判定指标之一。

关键词：猪 热休克蛋白 sybr green 荧光定量pcr 

单位：南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室; 南京210095; 农业部动物检疫所; 青岛266032