摘要：[目的]为了避免在制备基因治疗或基因免疫的质粒时使用动物源性的核糖核酸酶A（RNase A）.[方法]提取牛胰腺总RNA,利用RT-PCR扩增出牛核糖核酸酶A cDNA,RT-PCR产物克隆到pGEM-T载体测序验证后,将此cDNA亚克隆到大肠杆菌分泌型表达载体pEZZ18中.[结果]SDS-PAGE电泳显示其转化菌经温度诱导后能表达预计的大小为28 kD重组蛋白.用渗透法释放出表达产物,将其加入到经碱裂解粗提的质粒DNA中并孵育0.5 h,琼脂糖凝胶结果表明表达产物能很好地去除细菌的RNA并且不降解超螺旋质粒DNA.[结论]在质粒的纯化过程中,重组牛核糖核酸酶可以替代动物源性的RNase A.

关键词：rnase a 克隆 表达 鉴定 

单位：扬州大学兽医学院; 扬州225009; 中国农业科学院生物制品工程技术中心; 北京100081