摘要：【目的】构建鼠源抗柑橘溃疡病菌二硫键稳定Fv抗体（dsFv）片段基因,原核表达并将其复性为具有免疫活性的dsFv抗体。【方法】采用PCR定点突变的方法构建dsFv重链（VH）及轻链可变区（VL）基因,分别将其连接入表达载体中,于E.coliBL21（DE3）中诱导表达,表达产物溶解后稀释入复性缓冲液中使其重折叠为dsFv抗体并纯化。SDS-PAGE及Western-blot分析表达及复性产物,BIAcore检测dsFv与Xac-LPS的亲和力,ELISA验证dsFv的特异性及稳定性。【结果】测序结果表明在VH的44位和VL的100位成功引入了半胱氨酸突变位点,实现了高效的原核表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS-PAGE分析显示VH和VL的大小为23kD,并将其成功复性,复性后大小为46kD。BIAcore分析表明dsFv对Xac-LPS保持了很高的亲和力,亲和常数（KD）达到3.40×10^-10M。ELISA证明dsFv具有较高的抗原特异性并且热稳定性较scFv提高近20℃。【结论】成功表达并复性了dsFv抗体,为柑橘溃疡病菌的免疫诊断提供了高效优质的重组抗体。

关键词：柑橘溃疡病菌 二硫键稳定fv抗体 包涵体 复性 biacore分析 

单位：重庆大学生物工程学院/重庆大学基因工程研究中心/重庆市基因功能与调控重点实验室 重庆400030 四川省泸州医学院免疫学教研室 四川泸州646000