摘要：【目的】为鉴定棉花黄萎病菌随机插入突变体的表型特征，构建黄萎病菌遗传转化和功能基因研究的技术平台。【方法】采用农杆菌介导的T-DNA插入和高效TAIL—PCR方法。【结果】获得了2628个棉花黄萎病菌VD991的T-DNA随机插入的突变体和15个突变体插入位点的侧翼序列。部分突变体的表型特征和插入位点侧翼序列分析表明，①突变体的菌落形态分为菌丝型、菌核型和中问型3类，菌核型约占7．3％；②在摇瓶培养条件下，突变体产孢高峰在接种后第5—6天，菌核型突变体的产孢能力普遍高于菌丝型；③棉花黄萎病菌VD991可以产生胞外蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶。筛选获得蛋白酶分泌缺失的突变体3个，淀粉酶分泌缺失的突变体1个，果胶酶分泌降低的突变体6个；④茵核型突变体的致病力普遍高于野生型。获得了6个致病力减弱的突变体；⑤突变体侧翼序列与同种的大丽轮枝菌菌株VDLs．17基因组的序列一致性在95％-100％之间，与不同种的黑白轮枝菌VaMs．102序列的一致性为87％-94％。【结论】农杆菌介导的T-DNA随机插入可用于棉花黄萎病菌突变体的构建，突变体微菌核的产生与其产孢能力、致病性存在相关关系。美国大丽轮枝菌菌株VDLs．17基因组可用作黄萎病菌VD991功能基因研究的参考序列。

关键词：黄萎病菌 表型鉴定 侧翼序列分析 

单位：中国农业科学院生物技术研究所 北京100081 中国农业科学院作物科学研究所 北京100081