摘要：【目的】构建山羊β-乳球蛋白（BLG）基因打靶载体,以期用人乳白蛋白（hALA）基因的编码区置换山羊BLG基因的编码区,借助BLG的内源性调控序列指导hALA的表达。【方法】以山羊血液基因组为模板PCR扩增获得BLG基因的5′端侧翼序列（BLG5）、第5外显子和第5内含子的部分序列（E5）和3′端侧翼序列（BLG3）,同时以人血液基因组为模板克隆了hALA基因的基因组序列（ALA）,并将上述片段连接到克隆载体pMD18 T-simple或pBluescript KS（-）,得到载体pB5T,pB3T,pAKS和pAEKS。对pB5T进行亚克隆,将BLG5连接到pAEKS中,构建载体pBAE;最后将BLG5-hALA-E5和BLG3分别连接到打靶载体ploxpII中,标记为pBAT。【结果】经酶切和/或测序等鉴定,以上载体均正确。【结论】构建得到了旨在将hALA定向插入到山羊乳蛋白基因座位的打靶载体。

关键词：基因打靶 乳腺生物反应器 山羊 

单位：西北农林科技大学动物医学院 陕西杨凌712100