摘要：【目的】探讨绵羊前体脂肪细胞冷冻保存的最佳冻存保护剂种类和浓度。【方法】在含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液中分别添加不同浓度的DMSO、EG、PG、G和PVP作为冻存液,对原代培养的绵羊前体脂肪细胞进行冷冻保存后,检测复苏细胞存活率、细胞增殖能力、细胞中脂肪沉积量,测量GPDH活性,并用实时荧光定量PCR检测PPARγ和LPL mRNA的表达水平,最后对复苏细胞进行染色体核型分析。【结果】各种冻存保护液中,10%DMSO和5%DMSO＋5%PVP组细胞存活率最高,与对照组相比差异不显著（P〉0.05）,其它各试验组复苏细胞存活率均显著低于对照组（P〈0.05）;各试验组中10%DMSO组细胞增殖能力最强,且与对照组相比差异不显著（P〉0.05）;细胞复苏后培养6 d,各试验组脂肪沉积量与对照组之间没有显著差异（P〉0.05）,而第11天时,10%DMSO组脂肪沉积量显著高于其它试验组（P〈0.05）,且与对照组相比差异不显著（P〉0.05）;各试验组GPDH活性和LPL、PPARγmRNA的表达量与对照组之间没有显著差异（P〉0.05）;染色体核型分析发现,复苏细胞二倍体细胞占主体,与原代细胞没有显著差异（P〉0.05）。【结论】含20%FBS的DMEM/F12培养液中添加10%DMSO或10%PVP、5%DMSO＋5%PVP均能有效保存绵羊前体脂肪细胞,但以10%DMSO最佳。

关键词：冷冻保存 前体脂肪细胞 绵羊 冷冻保护剂 

单位：西北民族大学实验中心 兰州730030 甘肃农业大学动物科学技术学院/国家绒毛用羊产业体系环境控制实验室 兰州730070 西北民族大学生命科学与工程学院 兰州730030 甘肃省动物细胞工程技术研究中心 兰州730030