摘要：【目的】构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5（亦称UCH37）的表达载体，并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-D1／Smads信号通路的影响。【方法l通过观察绿色荧光的表达量及real-timePCR反应优化转染条件，转染Arkadia和UCH37siRNA，real-timePCR检测mRNA表达抑制率。分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6／GFP／Neo，经鉴定后转染细胞，real—timePCR和Westernblotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化。【结果】①30umolsi RNA和1．5uL Lipofectamine 2000为最佳转染条件；②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显；③载体的插入序列完全正确，且pGPU6／GFP／Neo—Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达，而pGPU6／GFP／Neo—OC1137使Smad7表达下降。【结论】成功构建了表达载体pGPU6／GFP／Neo—Arkadia和pGPU6／GFP／Neo—UCH37，且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1／Smads信号通路。

关键词：arkadia基因 uch37基因 转染 表达载体 

单位：北京农学院动物科技学院 北京102206