摘要：【目的】为获得禽戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）中国分离株（CaHEV）ORF3基因重组蛋白,并对其抗原性进行分析【。方法】提取CaHEV总RNA,通过RT-PCR获得ORF3基因,构建重组质粒pFastBac-HTB-ORF3,转座DH10Bac感受态细胞,提取重组杆粒Bacmid-ORF3,转染sf9细胞,用SDS-PAGE、IFA和Western blot对重组蛋白表达进行鉴定。优化表达条件,将纯化的ORF3蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用制备的多抗分别与截短表达的3段CaHEV ORF3蛋白进行Western blot和ELISA检测,分析ORF3蛋白的抗原表位区。【结果】SDS-PAGE、Western blot和IFA结果表明CaHEV ORF3蛋白被成功表达且存在细胞内,昆虫细胞在接毒后4天表达量最高。将ORF3重组蛋白免疫小鼠,利用间接ELISA方法,对制备的多抗倍比稀释检测,效价达到104,Western blot和ELISA分析表明ORF3蛋白C端74—88氨基酸处具有较强的抗原性。【结论】本试验用Bac-to-bac系统成功构建含有CaHEV ORF3基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中得到表达,其主要抗原表位位于C端74—88氨基酸,为进一步研究禽HEV ORF3的蛋白结构和功能奠定了基础。

关键词：禽戊型肝炎病毒中国分离株 orf3蛋白 真核表达 抗原性 

单位：山东农业大学动物科技学院预防兽医系免疫生物学实验室 山东泰安271018 西北农林科技大学兽医免疫学研究所/西北农林科技大学动物医学院 陕西杨凌712100