摘要：【目的】布鲁氏菌外膜蛋白BP26是布鲁氏菌的重要毒力因子，本研究采用bp26基因缺失株和BP26蛋白分别与胚胎滋养层细胞（HPT-8）作用，探讨布鲁氏菌bp26基因的生物学功能。【方法】采用Ni柱亲和层析法纯化BP26蛋白，overlap技术构建布鲁氏菌bp26基因缺失株，用BP26蛋白和bp26基因缺失株分别侵染HPT-8细胞，观察细胞形态变化，ELISA检测上清中的细胞因子。【结果】从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆出bp26基因并在大肠杆菌EcoliBL21（DE3）中成功表达，获得纯化的BP26蛋白，经SDS-PAGE验证正确，Western-Blot鉴定具有免疫原性。将目的片段bp26基因的上下臂插入到自杀载体pGEM-7zf中，电转至布鲁氏菌疫苗株M5-90感受态细胞中，成功筛选出了具有遗传稳定性的bp26基因缺失株。用BP26蛋白与bp26基因缺失株分别侵染HPT-8层细胞，BP26蛋白使细胞变形且贴壁不牢，缺失株导致细胞大量脱落溶解，ELISA检测蛋白侵染HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-a和LDH均高于PBS对照组，差异极显著（P〈0．01），而细胞因子IL-10的分泌下降。缺失株侵染HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-仅均高于M5-90对照组，LDH和IL-10均低于M5-90对照组，差异显著（P〈0．05）。【结论】成功获得了布鲁氏菌BP26蛋白和M5-90Abp26缺失株，BP26蛋白可以引起HPT-8细胞的炎性反应，有细胞毒性作用，bp26基因缺失株对HPT-8细胞有损伤作用，bp26基因在布鲁氏菌侵染宿主细胞过程中起重要作用。

关键词：布鲁氏菌 bp26蛋白 bp26缺失株 细胞因子 

单位：石河子大学动物科技学院 新疆石河子832003