摘要：【目的】用两种方法构建miR-34c的慢病毒表达载体，并包装成慢病毒颗粒，为经济、高效的进行miR-34c超表达提供方案，为进-步研究miR-34c的作用奠定基础。【方法】从小鼠基因组中扩增miR-34c前体，分别插入pLL3．7的CMV启动子起始的GFP之后或u6启动子后，构建成载体pLL3.7-CMV-34c及pLL3．7-U6-34c。将重组慢病毒载体和包装质粒混合物转染包装细胞293T细胞，包装产生慢病毒颗粒，测定病毒滴度。感染293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞，用293T细胞与奶山羊雄性生殖干细胞的GFP表达程度测定转染效率，用定量PeR方法测定miR-34c的表达效率。【结果】重组质粒酶切及PCR分析及转化菌液测序，证明插入序列正确，qPCR检测显示：miR-34c的表达在慢病毒载体感染的293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞均显著上调。【结论】用pLL3．7慢病毒载体中的CMV和u6两种启动子均可经济高效地进行miR-34c超表达，且由u6启动子启动的miR-34c慢病毒表达载体可以成功高效感染关中奶山羊雄性生殖干细胞。

关键词：慢病毒载体 雄性生殖干细胞 奶山羊 

单位：西北农林科技大学动物医学院/陕西省干细胞工程技术研究中心 农业部动物生物技术重点开放性实验室 陕西杨凌712100