摘要：[目的]构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板，分别扩增SV40Pileo、IRES、tk-P10yA，通过overlapPCR连接，并在两端添加方向相同的LoxP序列，构建转基因基本载体PB—NIT；然后通过overlapPER扩增获得Tet—cMv—SV40T-T2A—P53-PolyA基因表达盒，将其插入PB—NIT中，构建载体PB—NIT-STP；最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB—NIT-STP，构建载体PB—rtTA—NIT—STP。【结果】经酶切和测序等鉴定，以上载体均正确；经转座活性鉴定，共转染转座子载体PB—rtTA—NIT—STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍。【结论】得到了基于PiggyBa~转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体。

关键词：小鼠 sv40 t 转录激活域rtta piggybac转座子 

单位：西北农林科技大学动物科技学院基因组学实验室 陕西杨凌712100