摘要:【目的】构建草酸青霉菌11的cDNA文库,筛选溶磷相关基因。【方法】利用SMART技术构建草酸青霉菌11的初级cDNA文库,通过难溶磷培养基筛选具有溶磷能力的转化子,测序并进行生物信息学分析。在难溶磷液体培养基中,进行转化子对溶液pH值、可溶磷含量的影响和产有机酸试验。【结果】成功构建了草酸青霉菌11的初级cDNA文库,其库容量约为5.29×10^6cfu·mL-1,重组率为99%;利用难溶磷固体培养基筛选,得到具有溶磷圈的转化子48个,其中转化子I一4的cDNA序列全长536bp,为一个新的序列,基因编码氨基酸残基序列长129n.t。转化子EcoliHST081-4在液体难溶磷培养基中培养,提高了有机酸的表达量,并增加了有机酸的种类,在培养i2h后,开始产生乙酸,24h后,溶液中产生乳酸、苹果酸和α-酮戊二酸,培养36h,溶液pH值由6.32降到3.69,可溶磷含量达到0.1076mg·mL-1。【结论】从草酸青霉II中筛选到一个溶磷相关基因pStI.
关键词:草酸青霉菌 cdna文库 溶磷相关基因 有机酸
单位:中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所 北京100081 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 北京100081 南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 南京210095
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