摘要：【目的】利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种相对定量检测坦布苏病毒的方法。【方法】针对坦布苏病毒NS5、E基因分别设计了1对特异性引物，同时设计1对扩增内参基因β-actin引物，将PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒，经筛选、鉴定纯化后，倍比稀释作为质控样品，用于实时荧光定量PCR中NS5、E基因及内参基因β-actin标准曲线的构建，并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。【结果】结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99 以上, 检测极限约为1.0E＋01拷贝数质粒DNA；特异性结果表明只能检测到坦布苏病毒的扩增曲线；批内和批间重复性试验的变异系数均小于0.5%；用已建立的方法对临床样品进行3次重复检测，病毒RNA的检出率为100%。【结论】本研究初步建立了基于坦布苏病毒NS5、E基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法，为养鸭场诊断和监测坦布苏病毒提供了一种新的特异、灵敏的检测方法。

关键词：坦布苏病毒 ns5基因 e基因 sybr 相对定量 

单位：山东农业大学动物科技学院 山东泰安271018